貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞如何傳代？

1.貼壁細(xì)胞如何進(jìn)行傳代？

去掉原T25培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)基，T25瓶加3-4 ml PBS洗1-2次;棄PBS，再加1.5 ml的Trypsin-EDTA (1X)消化液消化細(xì)胞，顯微鏡下觀察，待細(xì)胞變圓，細(xì)胞間隙明顯，部分細(xì)胞剛開始脫離瓶壁，加4 ml左右（血清）細(xì)胞培養(yǎng)液混勻終止消化，將細(xì)胞小心吹打下來，1000 rpm/min室溫離心5min;棄上清，細(xì)胞沉淀用（血清）細(xì)胞培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶(視細(xì)胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8)，每T25瓶補(bǔ)足培養(yǎng)基至5-6 ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。

2.懸浮性細(xì)胞應(yīng)如何傳代處理？

一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中，稀釋細(xì)胞濃度即可，若培養(yǎng)液太多時(shí)，將細(xì)胞懸液移入離心管中，1000 rpm/min 室溫離心5 min。棄上清，細(xì)胞沉淀用（血清）細(xì)胞培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶(視細(xì)胞密度而定1:4-1:8)，每T25瓶加培養(yǎng)液至4-5 ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。有些懸浮細(xì)胞趨于成團(tuán)生長，此時(shí)細(xì)胞生長狀態(tài)良好，當(dāng)補(bǔ)液時(shí)，需避免反復(fù)吹打。