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    砷鉬酸比色法

    發(fā)布時間： 2023-01-16　　點擊次數(shù)： 799次

    原理

    還原糖是具有羰基（>C=O）的糖，能將其它物質(zhì)還原而其本身被氧化。

    （1） 還原糖在堿性條件及有酒石酸鉀鈉存在下加熱，可以定量地還原二價銅離子為一價銅離子，產(chǎn)生磚紅色的氧化亞銅沉淀，其本身被氧化。具體反應(yīng)如下：


    （2）氧化亞銅在酸性條件下，可將鉬酸銨還原，還原型的鉬酸銨再與砷-酸氫二鈉起作用，生成一種藍色復(fù)合砷鉬藍，其顏色深淺在一定范圍內(nèi)與還原糖的含量（即被還原的Cu2O 量）成正比，用標準葡萄糖與砷鉬酸作用，比色后做標準，就可測得樣品還原糖含量。

    材料與儀器

    植物材料
    銅試劑 砷鉬酸試劑 標準葡萄糖原液
    分光光度計 具塞刻度試管 水浴鍋 刻度吸管 容量瓶 漏斗 研缽

    步驟

    1.標準曲線的制作：


    在一系列刻度試管中，分別加入200μg/mL 標準葡萄糖0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5及0.6 mL，再順序加入蒸餾水2、1.9、1.8、1.7、1.6、1.5 及1.4 mL，配成濃度分別為0、10、20、30、40、50 及60μg/mL 的系列葡萄糖溶液。每試管加入銅試劑2mL，混勻后沸水浴中加熱10min，立即冷卻，再加入2mL 砷鉬酸試劑，振蕩兩分鐘后稀釋到20mL,用分光光度計在620nm 波長下比色，測其光密度OD620nm（做一式兩份）。以糖濃度微克數(shù)為橫坐標，光密度OD620nm 為縱坐標，繪制標準曲線。


    2.植物樣品中還原糖的提?。?/p>


    將樣品洗凈，吸干其表面水分，切碎混勻，稱取1g 放入研缽中，加入約0.5g 石英砂，磨成勻漿，加水將樣品由玻璃漏斗沖入100mL 容量瓶中，加水達70-80mL，搖勻后置于80℃恒溫水浴上浸提0.5h。


    待上述樣品冷卻后，沉淀蛋白質(zhì)，加入5%硫酸鋅5mL，再慢慢滴入0.3mol/L Ba(OH)2 5mL，以沉淀蛋白質(zhì)。振蕩后靜置，至上層出現(xiàn)清液后再加一滴Ba(OH)2,直至無白色沉淀時，向容量瓶加水至刻度。


    3.還原糖含量的測定：


    過濾上述已定容的樣品液，取5mL 濾液，再定容到100mL（此步視樣品的含糖量而定）。取已稀釋的溶液2mL，與標準葡萄糖顯色法相同：加銅試劑2mL，煮沸10min，加砷鉬酸試劑2mL，振蕩2mL，定容到15ml，620nm 波長下比色，記下光密度OD620nm（至少重復(fù)兩次）。

    注意事項

    比色皿的外面應(yīng)被擦干凈。

    常見問題

    OD是當光經(jīng)過一個樣本時，部分光會被吸收。在光譜學(xué)，透光率是出射光和入射光強度的比。


    以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

     

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