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大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)——貼塊法
發(fā)布時(shí)間: 2021-12-04 點(diǎn)擊次數(shù): 1029次材料與儀器
SD大鼠
PBS FBS DMEM
手術(shù)剪 手術(shù)鉗 眼科剪刀 眼科鑷子 大頭針 手術(shù)刀 培養(yǎng)皿步驟
一、實(shí)驗(yàn)步驟
1. SD 大鼠(150-200 g),斷頭,浸入75%的酒精中15 min。
2. 置入超凈臺(tái)中,將大鼠固定于殺鼠板上,在無(wú)菌條件下打開(kāi)腹腔,分離出胸主動(dòng)脈、腹主動(dòng)脈, 摘出。
3. PBS 清洗3 遍,剝?nèi)ネ饽?,用手術(shù)刀片刮去內(nèi)膜,留下中膜并將其移入1 mL 的培基中、剪成1x1 mm2 大小組織塊。
4. 再將PBS清洗組織塊,移入25 mL 的培養(yǎng)瓶中,用尖嘴彎管均勻貼好組織塊,放入37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱倒置培養(yǎng)6 小時(shí)后,待組織塊貼壁后,再加入2.5 mL 培養(yǎng)液后放回培養(yǎng)箱中。
5. 隨后每3 天予以全量換液。
二、結(jié)果
3-5 天后可見(jiàn)組織塊周圍有細(xì)胞爬出,大約2 周后80-90%融合。
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