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    大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)——貼塊法

    發(fā)布時(shí)間: 2021-12-04  點(diǎn)擊次數(shù): 1014次

    材料與儀器

    雄性Wistar大鼠
    DMEM 胎牛血清 內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子 肝素鈉 青鏈霉素 明膠 胰蛋白酶 PBS D-Hanks’液
    手術(shù)器械 眼科剪 眼科鑷 培養(yǎng)皿 手術(shù)刀 培養(yǎng)瓶 CO2培養(yǎng)箱

    步驟


    1. 頸椎脫臼處死大鼠,將整個(gè)大鼠浸泡于75%乙醇中消毒約1  min。在無(wú)菌狀態(tài)下,逐層剪開胸腔,分離取出主動(dòng)脈,放含無(wú)菌 D-Hanks’液培養(yǎng)皿中。


    2. 用眼科剪、鑷盡量去除血管外膜的脂肪和纖維組織。然后,用含抗生素的D-Hanks’液沖洗血管的外表面及血管腔內(nèi)的凝血數(shù)次,再放入另一無(wú)菌培養(yǎng)皿中。


    3. 用眼科剪縱向剪開血管,平展在培養(yǎng)皿中。用非常銳利的手術(shù)刀將其切成1 mm3大小的動(dòng)脈植 塊(或者用剪刀剪,依照個(gè)人習(xí)慣),然后種植到培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿(培養(yǎng)瓶或皿用1%明膠預(yù)置 37℃下過(guò)夜, 使用前2h 移入CO2培養(yǎng)箱中。用時(shí)可以先經(jīng)含 10%小牛血清的培養(yǎng)液沖洗)。將動(dòng)脈植塊的內(nèi)膜面與瓶底接觸,種植密度約為 1 塊/cm2 。


    4. 置培養(yǎng)箱中靜置2 h(干貼壁)。然后,加入0.5 ml 含 25%胎牛血清的培養(yǎng)液,液量以略蓋過(guò)動(dòng)脈植塊內(nèi)膜面,而又不使植塊漂浮為宜。24 h 后,更換培養(yǎng)液,加入 2-3 ml 培養(yǎng)液。


    5. 72 h 左右的時(shí)候,當(dāng)觀察到內(nèi)皮細(xì)胞充分長(zhǎng)出,而成纖維細(xì)胞剛要長(zhǎng)出的時(shí)候,將動(dòng)脈植塊除去,刮除成纖維細(xì)胞,換培養(yǎng)液1 次。以后每2 天換液一次,每次換1/2~1/3 的液量。繼續(xù)培養(yǎng) 8-10 d, 細(xì)胞融合成單層,即可傳代。


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