高效率轉(zhuǎn)染N2a小鼠神經(jīng)瘤母細(xì)胞的操作方法

轉(zhuǎn)染條件：

培養(yǎng)板：6孔板

轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA大小： 6000bp

轉(zhuǎn)染試劑用量：10ul

核酸用量：電訊

轉(zhuǎn)染時(shí)間：48小時(shí)

轉(zhuǎn)染試劑：Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑（AD600150)

培養(yǎng)基：Z7181-500 胎牛血清

細(xì)胞凍存：CE70100T無血清細(xì)胞凍存液

操作步驟:

提前 1 天接種細(xì)胞：細(xì)胞匯合度在 60-80%左右，再進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

核酸復(fù)合物制備：將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合，用移液器吹吸 10-15 次混勻，室溫靜 止 10-15 分鐘。

在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物：根據(jù)參考用量在細(xì)胞中加入核酸復(fù)合物，并輕輕混勻；細(xì)胞培養(yǎng)基 里面可以含有血清。

細(xì)胞換液：轉(zhuǎn)染 24 小時(shí)后對細(xì)胞進(jìn)行正常換液，懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程中不用換液。

分析結(jié)果：質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染 48-72 小時(shí)后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率，48-96 小時(shí)檢測 mRNA 或蛋白表達(dá)。若進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選，則在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時(shí)左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選。siRNA 轉(zhuǎn)染后 9 小時(shí)熒光檢測轉(zhuǎn)染效率，48-72 小時(shí)檢測 mRNA 或蛋白表達(dá)。