銷售熱線

19126518388
  • 技術(shù)文章ARTICLE

    您當前的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 貼壁細胞培養(yǎng)

    貼壁細胞培養(yǎng)

    發(fā)布時間: 2021-10-29  點擊次數(shù): 993次
    材料與儀器


    凍存細胞
    70% 乙醇 PBS 胰酶/EDTA
    25 cm2 和 150 cm2 組織培養(yǎng)瓶 CO2 培養(yǎng)箱


    實驗步驟


    1. 將含有凍存細胞的安瓿放入 37℃ 水浴中解凍。

    2. 用 70% 乙醇對安瓿的頂端進行消毒,打開安瓿,用吸管將細胞轉(zhuǎn)移到含有 5 ml 起始培養(yǎng)基的 25 cm2 組織培養(yǎng)瓶中,輕輕搖動培養(yǎng)瓶,使細胞均勻分布于培養(yǎng)瓶中,將其放入 5% CO2 加濕培養(yǎng)箱中 37℃ 培養(yǎng)過夜。

    3. 吸出起始培養(yǎng)基,換成適當?shù)木S持培養(yǎng)基。將細胞放回 CO2 培養(yǎng)箱 37℃ 培養(yǎng),每天檢查細胞是否生長至匯片。

    4. 如果細胞生長至匯片,吸出培養(yǎng)基。

    5. 用 PBS 或胰酶/EDTA 清洗細胞,除去細胞上殘留的血清,將洗液吸出。

    6. 用 37℃ 、適當體積的胰酶/EDTA 剛好覆蓋單層細胞(如對于 25 cm2 培養(yǎng)瓶需要 0.3 ml)。消化 30~40 s(細胞應(yīng)該分開),晃動培養(yǎng)瓶使細胞*分開。

    7. 加入 1.4 ml 適當?shù)木S持培養(yǎng)基,用吸管來回吹打細胞懸液多次以打散細胞團(這些細胞用于傳代)。

    8. 吸出 0.5 mL 的細胞懸液,將其加入到新的含有 30 ml 維持培養(yǎng)基 150 cm2 的組織培養(yǎng)瓶中。輕輕搖動培養(yǎng)瓶,使細胞均勻分布于培養(yǎng)瓶中,將其放入 CO2 培養(yǎng)箱中 37℃ 培養(yǎng)直到細胞生長至匯片(大約 1 周)。大約間隔一周用維持培養(yǎng)基進行 1:20 稀釋傳代以維持細胞生長。



產(chǎn)品中心 Products