Q1
培養(yǎng)液pH對細胞生長的影響?
答:由于大多數(shù)細胞適宜pH為7.2-7.4,偏離此范圍可能對細胞生長將產(chǎn)生有害的影響,目前也有些無血清培養(yǎng)基或者轉(zhuǎn)染用的培養(yǎng)基PH值會在6.5左右。因為各種細胞對pH的要求也不*相同,原代培養(yǎng)細胞一般對pH變動耐受差,無限細胞系耐受力強。但總體來說,細胞耐酸性比耐堿性強一些。在配制培養(yǎng)用液時,需要注意一點:培新配的培養(yǎng)基在經(jīng)過0.10um或0.22um濾膜過濾時,溶液的pH還會向上浮動0.2左右
答:通常細胞生長得非常快時,pH值通常下降得很快。此時可以及時傳代、提高傳代比例或降低血清量等方法進行解決。此外,培養(yǎng)瓶蓋擰得太緊、NaHCO3緩沖系統(tǒng)緩沖能力不夠、培養(yǎng)液中鹽濃度不正確、細菌、酵母或真菌污染等也能導(dǎo)致pH值通常下降得很快。
(1)按培養(yǎng)液中NaHCO3濃度增加或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度,2.0g/L到3.7g/L濃度NaHCO3對應(yīng)CO2濃度為5%到10%。
(2)改用不依賴CO2培養(yǎng)液。
(3)松開瓶蓋1/4圈。加HEPES緩沖液至10到25mM終濃度。
(4)在CO2培養(yǎng)環(huán)境中改用基于Earle′s鹽配制的培養(yǎng)液,在大氣培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)改用Hanks鹽配制的培養(yǎng)液。
(5)如果是污染造成的則丟棄培養(yǎng)物或用抗生素除菌。
答:丙酮酸鈉可以作為細胞培養(yǎng)中的替代碳源,盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,但是,如果沒有葡萄糖的話,細胞也可以代謝丙酮酸鈉。
答:HBS和EBS的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagle′s(2.2g/L)中比在Hanks′(0.35g/L) 中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡,以維持溶液的PH值。Eagle′s液在空氣水平的CO2中,溶液會變堿,Hanks′液在CO2培養(yǎng)箱中會變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織,需要用Eagle′s液,。如果僅僅是清洗將要在細胞培養(yǎng)基中儲存的組織,用Hanks′液就可以了。
答:一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng),而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細胞培養(yǎng)時應(yīng)使用的CO2濃度。當培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7g時,細胞培養(yǎng)時應(yīng)使用10%CO2;當培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5g時,則應(yīng)使用5%CO2培養(yǎng)細胞。
答:可能的原因有培養(yǎng)箱內(nèi)無CO2;培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動太大;細胞凍存或復(fù)蘇過程中損傷;培養(yǎng)液滲透壓不正確;培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積等。
解決辦法可以檢測培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度,檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度;取新的保存細胞種;檢測培養(yǎng)液滲透壓,換入新鮮培養(yǎng)液等。