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    還原糖和總糖的測(cè)定

    發(fā)布時(shí)間： 2023-01-30　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1613次

    原理

    各種單糖和麥芽糖是還原糖，蔗糖和淀粉是非還原糖。利用溶解度不同，可將植物樣品中的單糖、雙糖和多糖分別提取出來，再用酸水解法使沒有還原性的雙糖和多糖徹-底水解成有還原性的單糖。在堿性條件下，還原糖將3,5-二硝基水楊酸還原為3-氨基-5-硝基水楊酸（棕紅色物質(zhì)），還原糖則被氧化成糖酸及其它產(chǎn)物，在一定范圍內(nèi)，還原糖的量與棕紅色物質(zhì)深淺的程度呈一定的比例關(guān)系，在540nm 波長(zhǎng)下測(cè)定棕紅色物質(zhì)的消光值，查對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算，便可分別求出樣品中還原糖和總糖的含量。多糖水解時(shí)，在單糖殘基上加了一分子水，因而在計(jì)算中須扣除已加入的水量，測(cè)定所得的總糖量乘以0.9 即為實(shí)際的總糖量。

    材料與儀器

    步驟

    一、實(shí)驗(yàn)材料、儀器和試劑

    1、實(shí)驗(yàn)材料：面粉。

    2、儀器： (1) 25ml 血糖管或刻度試管×11；(2) 大離心管或玻璃漏斗×2；(3) 燒杯：100ml×1；(4) 三角瓶：100ml×1；(5) 容量瓶：100ml×3；(6) 刻度吸管：1ml×11、2ml×4、10ml×1；(7) 恒溫水??；(8) 沸水??；(9) 離心機(jī)(過濾法不用此設(shè)備)；(10)電子天平；(11)分光光度計(jì)；

    3、試劑：

    (1) 1mg/ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液：準(zhǔn)確稱取 100 mg分析純葡萄糖(預(yù)先在 80 ℃烘至衡重)，置于小燒杯中，用少量蒸餾水溶解后，定量轉(zhuǎn)移至100ml的容量瓶中，以蒸餾水定容至刻度，搖勻，冰箱中保存?zhèn)溆谩?br style="box-sizing: border-box; border: 0px solid; --tw-translate-x:0; --tw-translate-y:0; --tw-rotate:0; --tw-skew-x:0; --tw-skew-y:0; --tw-scale-x:1; --tw-scale-y:1; --tw-pan-x: ; --tw-pan-y: ; --tw-pinch-zoom: ; --tw-scroll-snap-strictness:proximity; --tw-ordinal: ; --tw-slashed-zero: ; --tw-numeric-figure: ; --tw-numeric-spacing: ; --tw-numeric-fraction: ; --tw-ring-inset: ; --tw-ring-offset-width:0px; --tw-ring-offset-color:#fff; --tw-ring-color:rgba(59,130,246,0.5); --tw-ring-offset-shadow:0 0 #0000; --tw-ring-shadow:0 0 #0000; --tw-shadow:0 0 #0000; --tw-shadow-colored:0 0 #0000; --tw-blur: ; --tw-brightness: ; --tw-contrast: ; --tw-grayscale: ; --tw-hue-rotate: ; --tw-invert: ; --tw-saturate: ; --tw-sepia: ; --tw-drop-shadow: ; --tw-backdrop-blur: ; --tw-backdrop-brightness: ; --tw-backdrop-contrast: ; --tw-backdrop-grayscale: ; --tw-backdrop-hue-rotate: ; --tw-backdrop-invert: ; --tw-backdrop-opacity: ; --tw-backdrop-saturate: ; --tw-backdrop-sepia: ; font-size: 1rem !important; line-height: 1.625rem !important;"/>
    (2) 3,5-二硝基水楊酸試劑：將6.3g 3,5-二硝基水楊酸和262ml 2NNaOH 溶液，加到500ml含有185g酒石酸甲鈉的熱水溶液中，再加5g結(jié)晶酚和5g亞硫酸鈉，攪拌溶解。冷卻后加蒸餾水定容至1000ml，貯于棕色瓶中備用。

    (3) 碘-碘化鉀溶液：稱取5g碘和10g碘化鉀，溶于100ml 蒸餾水中。

    (4) 酚酞指示劑：稱取0.1g酚酞，溶于250ml 70%乙醇中。

    (5) 6NHCl

    (6) 6NNaOH

    二、操作步驟

    1、制作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線：

    取7支具有25ml刻度的血糖管或試管，編號(hào)，按下表所示的量，精確加入濃度為1mg/ml的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液和3,5-二硝基水楊酸試劑。


    將各管搖勻，在沸水浴中加熱5分鐘，取出后立即放入盛有冷水的燒杯中冷卻至室溫，再以蒸餾水定容至25ml刻度處，用橡皮塞塞住管口，顛倒混勻（如用大試管，則向每管加入21.5ml蒸餾水，混勻）。在540nm波長(zhǎng)下，用0號(hào)管調(diào)零，分別讀取1-6號(hào)管的消光值。以消光值為縱坐標(biāo)，葡萄糖毫克數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    2、樣品中還原糖和總糖的測(cè)定：

    （1）樣品中還原糖的提?。?br style="box-sizing: border-box; border: 0px solid; --tw-translate-x:0; --tw-translate-y:0; --tw-rotate:0; --tw-skew-x:0; --tw-skew-y:0; --tw-scale-x:1; --tw-scale-y:1; --tw-pan-x: ; --tw-pan-y: ; --tw-pinch-zoom: ; --tw-scroll-snap-strictness:proximity; --tw-ordinal: ; --tw-slashed-zero: ; --tw-numeric-figure: ; --tw-numeric-spacing: ; --tw-numeric-fraction: ; --tw-ring-inset: ; --tw-ring-offset-width:0px; --tw-ring-offset-color:#fff; --tw-ring-color:rgba(59,130,246,0.5); --tw-ring-offset-shadow:0 0 #0000; --tw-ring-shadow:0 0 #0000; --tw-shadow:0 0 #0000; --tw-shadow-colored:0 0 #0000; --tw-blur: ; --tw-brightness: ; --tw-contrast: ; --tw-grayscale: ; --tw-hue-rotate: ; --tw-invert: ; --tw-saturate: ; --tw-sepia: ; --tw-drop-shadow: ; --tw-backdrop-blur: ; --tw-backdrop-brightness: ; --tw-backdrop-contrast: ; --tw-backdrop-grayscale: ; --tw-backdrop-hue-rotate: ; --tw-backdrop-invert: ; --tw-backdrop-opacity: ; --tw-backdrop-saturate: ; --tw-backdrop-sepia: ; font-size: 1rem !important; line-height: 1.625rem !important;"/>
    準(zhǔn)確稱取2g食用面粉，放在100ml的燒杯中，先以少量的蒸餾水調(diào)成糊狀，然后加50ml蒸餾水，攪勻，置于50℃恒溫水浴中保溫20分鐘，使還原糖浸出。離心或過濾，用20ml蒸餾水洗殘?jiān)?，再離心或過濾，將兩次離心的上清液或?yàn)V液全部收集在100ml的容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，混勻，作為還原糖待測(cè)液。

    (2)樣品中非還原糖的水解和提?。?br style="box-sizing: border-box; border: 0px solid; --tw-translate-x:0; --tw-translate-y:0; --tw-rotate:0; --tw-skew-x:0; --tw-skew-y:0; --tw-scale-x:1; --tw-scale-y:1; --tw-pan-x: ; --tw-pan-y: ; --tw-pinch-zoom: ; --tw-scroll-snap-strictness:proximity; --tw-ordinal: ; --tw-slashed-zero: ; --tw-numeric-figure: ; --tw-numeric-spacing: ; --tw-numeric-fraction: ; --tw-ring-inset: ; --tw-ring-offset-width:0px; --tw-ring-offset-color:#fff; --tw-ring-color:rgba(59,130,246,0.5); --tw-ring-offset-shadow:0 0 #0000; --tw-ring-shadow:0 0 #0000; --tw-shadow:0 0 #0000; --tw-shadow-colored:0 0 #0000; --tw-blur: ; --tw-brightness: ; --tw-contrast: ; --tw-grayscale: ; --tw-hue-rotate: ; --tw-invert: ; --tw-saturate: ; --tw-sepia: ; --tw-drop-shadow: ; --tw-backdrop-blur: ; --tw-backdrop-brightness: ; --tw-backdrop-contrast: ; --tw-backdrop-grayscale: ; --tw-backdrop-hue-rotate: ; --tw-backdrop-invert: ; --tw-backdrop-opacity: ; --tw-backdrop-saturate: ; --tw-backdrop-sepia: ; font-size: 1rem !important; line-height: 1.625rem !important;"/>
    準(zhǔn)確稱取1 g食用面粉，放在100ml 的三角瓶中，加入10 ml 6NHCl及15ml 蒸餾水，置于沸水浴中加熱水解30分鐘。取1~2 滴水解液于白瓷板上，加1滴碘-碘化鉀溶液，檢查水解是否完-全。如已水解完-全，則不顯藍(lán)色。待三角瓶中的水解液冷卻后，加入一滴酚酞指示劑，以6NNaOH中和至微紅，過濾，再用少量蒸餾水沖洗三角瓶及濾紙，將濾液全部收集在100ml的容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，混勻。精確吸取10ml定容過的水解液，移至另一100ml的容量瓶中，定容，混勻，作為總糖待測(cè)液。

    (3)顯色和比色：

    取5支25ml刻度的血糖或刻度試管，編號(hào)，按下表所示的量，精確加入待測(cè)液和試劑。

    注意事項(xiàng)

    常見問題

    1、用血糖管比大試管方便。

    2、離心比過濾易得清液。

    3、標(biāo)準(zhǔn)曲線制作與樣品含糖量測(cè)定應(yīng)同時(shí)進(jìn)行，一起顯色和比色


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