巨噬細(xì)胞應(yīng)該如何培養(yǎng)呢？

剛接種半小時左右剛貼壁時細(xì)胞呈圓形，折光度很好，鏡下觀察如小珍珠狀一個個地散落于培養(yǎng)皿中培養(yǎng)一段時間后一小片一小片的生長，片片不相連。

特點(diǎn)：

RAW264.7細(xì)胞極其容易出現(xiàn)偽足（長角）。需要及時觀察細(xì)胞，若出現(xiàn)偽足則提示該傳代了（可能是一天一傳）。

當(dāng)出現(xiàn)少量的偽足可正常傳代，有少數(shù)分化的細(xì)胞是正常的，很難保證可以*不分化。

分化的細(xì)胞：呈多角形，明顯的體積變大，時常有較長的觸角。

分化的RAW 264.7細(xì)胞

被胰酶消化過的RAW 264.7細(xì)胞表現(xiàn)出明顯的分化現(xiàn)象呈多角形，有較長觸角。

解決辦法：刮取是比較合適的方法。把細(xì)胞培養(yǎng)液倒掉，加入37℃預(yù)溫的PBS，然后刮細(xì)胞，食指和拇指夾緊細(xì)胞刮，細(xì)胞刮橡膠頭刮面切面與平皿平行，用腕力輕輕刮（注意用腕力刮，不要用臂力），切記只能刮一次，不要來回刮和反復(fù)刮，吹打的力度一定要輕，切勿暴力吹打。

更換血清批次后嚴(yán)重聚團(tuán)的RAW 264.7

原因推斷：血清來源于動物，其組成成分有1000種左右，且血清組成及含量常隨供血動物的年齡、生理?xiàng)l件和營養(yǎng)條件而異。每個批號的組分百分比含量都是不固定的，所以批間差異是存在的。RAW 264.7細(xì)胞本身有聚團(tuán)生長特性，但嚴(yán)重聚團(tuán)可能受到血清里的某些因子刺激。

解決辦法：先用血清試用裝，試用效果好，可購買和血清試用裝批次相同的正裝，囤積半年或一年的用量，有效避免批間差對細(xì)胞的影響（胎牛血清在-20℃保存可達(dá)5年）。

個別分化的RAW 264.7細(xì)胞

培養(yǎng)時，無法保證100% 不分化，通過傳代可以將分化比例控制在一定范圍。RAW264.7細(xì)胞生長速度快，2-3天即可傳一代， 傳代時間間隔超過3天很難吹下，每一次接種密度都要控制好。

解決辦法：推薦傳代比例為1:3-1:6；推薦傳代時間：2-3天；推薦傳代融合率：80%-90%。

RAW 264.7細(xì)胞

生長良好的RAW264.7 胞體邊界感清晰，各個喂得圓鼓鼓、胖嘟嘟的，時刻準(zhǔn)備著為人類生命科學(xué)研究而“獻(xiàn)身"。

最后為大家普及一條知識~

熱滅活可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。啟動的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，啟動淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞活化。在免疫學(xué)研究中，培養(yǎng)ES細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時，推薦使用熱滅活血清。

熱滅活時請將血清置于 56℃水浴30分鐘。最好另加一個盛放與血清等體積水的燒杯并將溫度計插入水中，以水中溫度56℃為計時開始時間，加熱過程中不時輕輕旋轉(zhuǎn)混勻血清。

實(shí)驗(yàn)顯示，對大多數(shù)的細(xì)胞而言，不需要使用熱滅活血清。經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn)或*沒有作用，造成細(xì)胞生長速率降低。同時沉淀物會顯著地增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察呈小黑點(diǎn)或絮狀物，影響細(xì)胞觀察。若非必須，不需要做熱滅活處理。