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    人生長激素的放射免疫分析法

    發(fā)布時(shí)間： 2021-12-16　　點(diǎn)擊次數(shù)： 957次

    材料與儀器

    hGH表達(dá)質(zhì)粒
    洗滌液 親和素包被珠
    試管 γ計(jì)數(shù)儀

    步驟


    1.  取轉(zhuǎn)染了hGH表達(dá)質(zhì)粒的哺乳動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)液100~500 μl。

    2.  加100 μl 培養(yǎng)液或標(biāo)準(zhǔn)品至12 mm×75 mm 圓底試管中。加入100 μl 125I-標(biāo)記的抗體溶液，混合。加入1顆親和素包被珠，蓋上試管蓋或用Parafilm膜封口，室溫下在一水平旋轉(zhuǎn)器上以約170 r/min 搖動(dòng)下溫育90 min。

    3.  加2 ml 冼滌液洗磁珠兩次。*吸干洗滌液。
     
    圖一、人生長激素表達(dá)載體
    圖一、人生長激素表達(dá)載體
     
    4.  將試管置于γ計(jì)數(shù)儀上計(jì)數(shù)1 min。
     
    5.  用試劑盒中的hGH標(biāo)準(zhǔn)品測得的數(shù)據(jù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。用這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線來計(jì)算未知樣品的hGH含量。


    同實(shí)驗(yàn)其他方法

    CAT活性的層析分析法

    1.  100 mm 培養(yǎng)皿中的轉(zhuǎn)染了CAT表達(dá)質(zhì)粒的貼壁細(xì)胞，用PBS洗兩次，每次5 ml每培養(yǎng)皿加入1 ml TEN溶液。將細(xì)胞置于冰浴5 min。   2.  用橡膠

    原位裂解細(xì)胞的CAT分析法

    1.  60 mm 培養(yǎng)皿中轉(zhuǎn)染了CAT表達(dá)質(zhì)粒的細(xì)胞，用2 ml PBS洗1次。每培養(yǎng)皿加入2 ml 低滲緩沖液，在室溫下溫育2~5 min。 2.  吸去低滲緩沖液，加入400 μl T

    CAT活性的相-抽提分析法

    一、來源于哺乳動(dòng)物細(xì)胞 1.  按“CAT活性的層析分析法"中的步驟1~5的凍融法，制備哺乳動(dòng)物細(xì)胞提取物。如果用胰蛋白酶消化或制細(xì)胞方法來收集細(xì)胞，則將原位裂解法的步驟1至4用以下的步驟2

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