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    含甲酰胺的測(cè)序膠

    發(fā)布時(shí)間： 2021-12-15　　點(diǎn)擊次數(shù)： 904次

    原理

    聚丙烯酰胺凝膠加人甲酰胺可以使造成條帶壓縮的測(cè)序產(chǎn)物的二級(jí)結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定。

    材料與儀器

    DNA
    甲酰胺 甲醇 乙醇 TEMED SDS
    電泳儀

    步驟

    1.  按基本方案步驟1~5組裝凝膠平板夾層。

     
    2.  按所需濃度配制甲酰胺凝膠溶液，加熱輕輕挽拌使之溶解，冷卻至30℃以下。

    3.  加入0.15 ml TEMED及1 ml 10%過硫酸銨，馬上灌膠于凝膠平板夾層，觀察聚合情況。

    4.  在45~70 W 恒功率下電泳。
     
    5.  按基本方案步驟19~33進(jìn)行干膠及處理，但步驟18在5%乙酸 / 20%甲醇固定液中固定凝膠15 min。


    同實(shí)驗(yàn)其他方法

    變性凝膠電泳實(shí)驗(yàn)

    1.  制作每塊凝膠時(shí)，首先要用肥皂及水小心嚴(yán)格地清洗兩塊30 cm×40 cm的前后玻璃平板，用去離子水沖洗后晾干，用噴射洗瓶噴10%乙酵或異丙醇使平板濕海。 2.  然后用Kimwi

    電解質(zhì)梯度測(cè)序膠

    1.  按基本方案步驟1~22灌制凝膠及進(jìn)行預(yù)電泳，但上槽緩沖液為0.5×TBE，下槽為1×TBE。 2.  按基本方案步驟23~26步準(zhǔn)備樣品及加樣。   3.

    緩沖液梯度測(cè)序膠

    1.  按基本方案步驟1~5組裝凝膠平板夾層。   2.  在2個(gè)100 ml 燒杯中，配制緩沖液梯度凝膠溶液：50 ml 用0.5×TBE配制，25 ml 用2.5×TBE配制

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