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    基因組DNA的快速純化方法

    發(fā)布時間: 2021-11-18  點擊次數(shù): 1189次

    材料與儀器

    尾部緩沖液 蛋白酶 K
    離心管 玻璃棒

    步驟

    第 1 天

    1. 大約 1.5 cm 長的尾部活檢樣品放在一個 1.5 ml 盛有 0.7 ml 尾部緩沖液的小離心管中,加 35 ul 10 mg/ml 蛋白酶 K,在 55℃ 振搖溫育過夜。

    尾部緩沖液(配 25 ml)

    50 mmol/L Tris,pH 8                           1.25 ml 1 mol/L Tris,pH 8

    100 mmol/L EDTA,pH8                        5 ml 0.5 mol/L EDTA,pH 8

    100 mmol/L NaCI                                  0.5 ml 5 mol/L NaCI

    1% SDS                                              1.25 ml 20% SDS

    存放于室溫。

    蛋白酶 K:10 mg/ml 水溶液,貯存于 -20℃。

    第 2 天

    2. 加 7 ul 10 mg/ml RNA 酶(不含 DNA 酶),在 37℃ 孵育 1~2 小時。

    3. 在微量離心機中對樣品離心 20 分鐘以沉淀鼠毛。

    4. 小心轉移 0.5 ml 上清,注意不要攪動沉淀。

    5. 在管子中加 0.5 ml 異丙醇并通過翻轉輕輕地進行混合。應該立即有線狀沉淀形成。

    不要劇烈混合。不要使 DNA 形成緊密團塊,否則會難以繞纏。

    6. 在 Bunsen 燈的火焰上加熱封閉 100 ul 玻璃小吸管的末端。

    7. 把末端封閉的小吸管浸到 DNA 溶液中并劇烈攪拌來纏繞 DNA。一直攪動吸管直到 DNA 緊緊地纏繞到上面。

    8. 洗 DNA 是在三個順序排列的盛大約 50 ml 乙醇的燒杯中各浸 10 次(1 個是 70% 乙醇,另 2 個是 100% 乙醇)。洗 5~8 個樣品后換洗滌溶液。

    9. 用一片膠帶標記玻棒末端,把它插在(DNA 端朝上)一塊橡皮泥,使風干 10~15 分鐘。

    10. 用鉆石記號筆在黏附了 DNA 的那一末端刻線,弄斷玻棒,把帶 DNA 的那段放到已作標記的微量離心管中。

    11. 加 0.5 ml TE ( pH 8 )。樣品在室溫下振蕩過夜。

    第 3 天

    12. 稍稍振蕩管子,用干凈鑷子拿掉玻璃棒(在不同樣品的操作之間燒一下鑷子): 繼續(xù)振搖 1~2 小時。(如果樣品只是用來進行 PCR 分析,玻棒可以留在管子里)。

    13. 以 1:10 稀釋樣品,測 OD260 值以確定濃度(1 OD260=50 ug/ml).

    14. DNA 貯存在 4℃。


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