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補(bǔ)體介導(dǎo)法細(xì)胞毒實驗
發(fā)布時間: 2021-11-01 點(diǎn)擊次數(shù): 1032次材料與儀器C57BL/6J小鼠
Hank’s液 單克隆抗體 補(bǔ)體 伊紅-Y染液
眼科剪 眼科鑷 平皿 不銹鋼網(wǎng) 試管 吸量管 尖吸管 載玻片 蓋玻片 顯微鏡實驗步驟一、實驗方法1. 小鼠胸腺細(xì)胞懸液的制備:將4~6周齡小鼠采用頸椎脫臼法處死,取出胸腺放入已加入約4 ml冷Hank’s液的平皿中,在100目的不銹鋼網(wǎng)上研磨后,過篩,放入試管,離心1 000 rpm,5分鐘,用Hank’s液洗兩次。將沉淀的細(xì)胞重懸于Hank’s液中,配成1×107/ml細(xì)胞懸液。
2. 取試管3支,標(biāo)明順序,依據(jù)下表依次加入1×107/ml胸腺細(xì)胞懸液、抗小鼠Thy-1的單克隆抗體(最適稀釋度)及Hank’s液,放入37℃水浴30分鐘。3. 取出后每管加入1%伊紅-Y染液1滴,混勻,室溫放置2分鐘。4. 重新混勻后分別在一張載玻片上滴片,加蓋玻片鏡檢。先在低倍鏡下觀察,再用高倍鏡觀察,比較3管中細(xì)胞死活情況。二、實驗結(jié)果死細(xì)胞呈紅色,無光澤且腫脹變大;活細(xì)胞不著色、有光澤且形態(tài)正常。高倍鏡下計數(shù)200個細(xì)胞并計算其中死細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)。計算公式如下:死細(xì)胞百分?jǐn)?shù)= EQ EQ \F(實驗管死細(xì)胞數(shù)%-對照管死細(xì)胞數(shù)%,100%-對照管死細(xì)胞數(shù)%)
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